Detecção da infecção pelo vírus da anemia infecciosa equina (eiav): idga, nested-pcr e rt-pcr

Resumo

A Anemia Infecciosa Equina (AIE) é uma doença infecciosa viral que atinge
todos os membros da família Equidae. A AIE é causada pelo Vírus da Anemia
Infecciosa Equina (EIAV), um vírus RNA de fita dupla, pertencente à família
Retrovirídae e gênero Lentivirus. As doenças causadas pelos retrovírus apresentam-
se como infecções persistentes, com período de latência que pode se estender
por toda a vida do animal, dificultando assim o diagnóstico da infecção. A
Imunodifusão em Gel de Agarose (IDGA) é o teste sorológico mais empregado
e oficialmente reconhecido para o EIAV em vários países, porém exige altos títulos
de anticorpos para a reação antígeno–anticorpo, visualizado a olho nu pela
formação de linhas de precipitação no gel. A soroconversão do animal pode ser
tardia, e inclusive os títulos podem variar ao longo da vida do animal, o que pode
favorecer testes falso-negativos. O objetivo deste trabalho foi analisar amostras
de soro e sangue de equídeos para a detecção de anticorpos e vírus (DNA proviral)
do EIAV livre por meio das técnicas de IDGA, Nested-PCR e RT-PCR.
Foi coletado sangue de equídeos (n=74) de diferentes municípios do estado da
Bahia para a obtenção de soro e de células mononucleares do sangue periférico
(PBMC) para ser submetidos às técnicas de IDGA, Nested-PCR e RT-PCR. A
técnica de Nested-PCR e o RT-PCR foi realizada utilizando “primers” específicos
para o gene gag. A fração PBMC das amostras (n=74) foi cultivada a 37ºC durante
7 dias e depois submetida a extração do DNA para detecção do vírus por Nested-
PCR. Do total de amostras, 46 soros (46/74) foram utilizados para extração
de RNA e detecção do vírus livre pela RT-PCR. Os resultados do IDGA e PCR
foram discordantes. De um total de 74 amostras, foi detectada a presença viral
nas células do sangue (Nested-PCR) em 20 equídeos soronegativos na IDGA e a
presença do vírus livre no soro (RT-PCR) foi detectada em 12 equídeos soronegativos
por IDGA. Diferentes aspectos poderiam estar envolvidos na discordância
dos resultados, dentre eles a baixa sensibilidade da IDGA ou níveis baixos de
anticorpos. A AIE é, até o momento, uma doença incurável e a legislação pertinente
preconiza o sacrifício dos animais soropositivos por IDGA. Preocupados
com esta situação, médicos veterinários, pesquisadores e agentes da defesa animal
constituíram e implantaram o Comitê Estadual de Sanidade Equina, a fim de
discutir, medidas de controle para esta importante enfermidade.